傳遞窗紫外燈表面消毒效果驗證(SOP案例全文完整版)

目  錄

1、概述... 3

2、實施日期及時間安排... 3

3、驗證小組成員... 3

4、儀器和設備... 3

5、材料與試劑... 3

6、驗證過程... 4

7、驗證結果記錄... 8

8、再驗證周期... 9

9、相關SOP. 9

10、QA職責... 9

11、修改事項... 9

12、文檔... 9

1、概述

進入凈化車間的零配件或其它物品通過傳遞窗，進入微生物室的物品通過傳遞窗，經過紫外消毒后進入微生物室。為了確認傳遞窗紫外燈的消毒效果，特起草方案對其進行驗證。本驗證用于生產車間、微生物室、無菌室傳遞窗紫外燈表面消毒效果檢查。

2、實施日期及時間安排

2007年月日開始進行驗證。

3、驗證小組成員

4、儀器和設備

5、器材

5.1滅菌刻度吸管（1ml，10ml）

5.2滅菌試管

5.3滅菌平皿

5.4酒精燈

5.5載體：（1.0×1.0cm的玻片）

6、材料與試劑

6.1純化水 

6.2營養瓊脂培養基

6.3改良馬丁瓊脂培養基

6.4營養肉湯培養基

6.5改良馬丁培養基

6.6金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]

6.7枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63 501]

6.8大腸桿菌[CMCC（B）44 102]

6.9白色念珠菌[CMCC（F）98 001]

6.10稀釋液（0.1％吐溫80，0.1％蛋白胨溶液）

7、驗證過程

7.1 試驗環境

    試驗在潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區域內進行，全過程嚴格遵守無菌操作。單向流空氣區、工作臺面及環境定期按《醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標準進行潔凈度驗證。

    每次操作開始前，開紫外燈照射1小時。

7.2 培養基的制備

7.2.1營養瓊脂培養基
配方：

營養瓊脂培養基粉 31.0g

純化水            1000ml

配制：

根據需要量稱取營養瓊脂培養基粉置適宜容器中，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至7.1±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。

7.2.2改良馬丁瓊脂培養基
配方：

           改良馬丁瓊脂培養基粉   42.0g

純化水                  1000ml

     配制：

根據需要量稱取改良馬丁瓊脂培養基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至6.4±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌115℃×20分鐘。

7.2.3營養肉湯培養基
配方：

           營養肉湯培養基   20g

純化水            1000ml

配制：

稱取營養肉湯培養基20克，加1000ml純化水，加熱溶解，加熱至沸，冷卻至常溫，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。

7.2.4改良馬丁培養基
配方：

           改良馬丁培養基粉   28.0g

純化水              1000ml

配制：

根據需要量稱取改良馬丁培養基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至6.4±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌115℃×20分鐘。

7.4 方法驗證試驗

7.4.1輻照強度測定

7.4.1.1開啟紫外燈5min后，用中心波長為253.7nm的紫外線強度測定儀在燈管下方垂直1m的中心處測量其輻照度值（uW/cm²）。

7.4.1.2測量時，電壓應穩定在220V。

7.4.1.3普通型或低臭氧型直管紫外線燈（30W），在燈管下方垂直1m的中心處，新燈管的輻照度值應≥90 uW/cm² 。使用中的燈管的輻照度值應≥70 uW/cm² ，低于此值者應予更換。

7.4.2照射劑量

表面消毒接受的照射劑量，應達殺滅目標微生物所需。對大腸桿菌，照射劑量應達到7.5×10³ uW·s/cm²,對金黃色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌應達到2.53×10⁴uW·s/cm²。

7.4.2.2照射劑量計算：

照射劑量（uW·s/cm² ）＝紫外燈管強度（uW/cm²）×時間（s）

7.4.3 細菌及其芽孢和真菌殺滅效果的測定

7.4.3.1菌液的制備   

金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、白色念珠菌培養后，將菌液進行活菌計數。

7.4.3.2 將滅菌載體平放于滅菌平皿內，每個載體滴注定量菌懸液，（載體回收菌量達5×10⁵～5×10⁶ cfu/片），涂勻，放37℃培養箱烘干。開啟紫外燈5min后，將16個染菌玻片平放于滅菌平皿內，水平放于適當距離照射，于4個不同間隔時間（15min、30 min、45 min、60 min）各取出4個染菌玻片，分別投入4個盛有5ml洗脫液試管中，振打80次。

7.4.3.3經適當稀釋后，取1ml洗脫液，作平板傾注，每個染菌玻片接種兩個，細菌放30～35℃培養48小時作活菌計數，真菌放23～28℃培養72小時作活菌計數。

7.4.3.4陽性對照，除不做照射處理外，取4個染菌玻片，分別投入4個盛有5ml洗脫液試管中，振打80次。余按7.4.2.3同樣操作。

7.4.3.5計算殺滅率

                          陽性對照回收菌數－試驗組回收菌數

     殺滅率（％）＝                                            ×100％

                               陽性對照回收菌數

7.4.3.6判定標準     對指示菌殺滅率≥99.9％判為消毒合格。

8、驗證結果記錄：

附件1. 試驗菌數量測定原始記錄

8、再驗證周期

傳遞窗構造或紫外燈管放置位置發生改變時。

9、相關SOP

參考：自凈式傳遞窗驗證過程中的性能確認

10、文檔

所有的相關文檔都應該保留至少5年，這些文檔應包括如下內容：

原始方案、修改后的方案（如果有的話）、偏差報告、原始數據、原始報告和最終報告、其中，報告應該包括以下內容：

記錄的原件（或復印件）、測試項目及條款、實驗開始和結束的日期、材料和方法描述、出現的偏差描述（如果有的話）、實驗結果。

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